仪器

仪器名称:Zeiss倒置共聚焦显微镜(LSM 880) 

房间号:1022 

仪器介绍 Zeiss LSM880倒置共聚焦荧光显微镜主要用于对培养活细胞或组织进行长时间的明场及荧光成像。该系统配备了Zeiss独有的Airyscan探测器,实现了分辨率、成像速度的同时提高。Airyscan拥有一组32阵列的GaAsP-PMT探测器,没有传统的针孔,感测器的32个微单元如同32个针孔,各自感测来自样品的光线,经由演算法重新加总与归位32微单元测得的各方位信号,形成正确的清晰影像。由于没有针孔,光信号不再被针孔遮蔽,Airyscan可接受更多来自样品的光线,Airyscan接受相当于传统针孔1.25倍的光线(1.25 AU),其32个微单元每一个相当于0.2AU的感测效果,因此可以大幅改善影像的信噪比,同时提升影像解析度与细节亮度。在波长488nm下,Airyscan的探测能力是传统共聚焦显微镜的1.7倍,XY分辨率可以达到140nm,Z轴分辨率可达到400nm。 

适用范围:

倒置显微镜适用于观察培养皿中的活细胞,配有DIC成像模式,可对透明的细胞进行成像。搭载的活细胞孵育系统,可匹配35mm和60mm培养皿以及标准载玻片,可以对活细胞进行长时间连续成像和对固定样品进行高分辨率成像。适用于观察并记录脑组织切片、活细胞的荧光标记、三维图像重构,细胞生物物质、离子的定性、定量、定时和定位分布检测等,进而分析脑组织、细胞内或细胞间发生的生理、生化变化过程。 

关键技术指标: 

激光器:

405nm(30mW)、561nm(20mW)、633nm(5mW)、多线氩离子绿色激光器458/488/514nm(25mW)。快速AOTF,8通道,多个通道之间的切换时间5微秒。 

物镜:

10x (Air, NA=0.45)

 20x (Air, NA=0.8)

25x (水,甘油,硅油,油浸镜,NA=0.8,工作距离 0.57mm)

40x (Air, NA=0.6,工作距离 3.48mm)

40x (Oil,NA=1.3,工作距离 0.2mm)

63x (Oil, NA=1.4,工作距离 0.19mm)

成像模式: 

普通透射光明场成像、DIC成像、荧光成像(DAPI、GFP、Cy3、Cy5)。其中,荧光光谱最小检测区间为3nm。 

DAPI: EX 365, BS FT 395, EM BP 445/50 

GFP: EX BP 470/40, BS FT 495, EM BP 525/50

CY3: EX BP 545/25, BS FT 570, EM BP 605/70

CY5: EX BP 640/30, BS FT 660, EM BP 690/50

 最佳染料列表:

通道

适用染料名称

DAPI

EX 365, BS FT 395, EM BP 445/50

  BFP (EBFP)(380\440)

  DAPI(359/461)

  DyLight 405(398\420)

  Hoechst 34580(392\440)

  LysoSensor Blue(374\424)

  LysoTracker Blue(373\422)

  Marina Blue(363\461)

  sgBFP™(387\451)

  Vybrant DyeCycle Violet(369\437)

GFP

EX BP 470/40, BS FT 495, EM BP 525/50

  BCECF (pH 5.5)(481\518)

  CFP2(490\510)

  Cy2™(492\507)

  Dendra2 (Green)(491\507)

  DiO(475\500)

  ecliptic pHluorin pH5.5(473\507)

  Emerald(491\511)

  FITC (Fluorescein)(495\519)

  Fluo-4(494\516)

  Fluorescein-pH 8.0(489\517)

  Fluoro-Emerald(494\518)

  GFP (EGFP)(489\511)

  LysoSensor Green(448\502)

  MitoTracker™ Green(490\512)

  NBD-X (MeOH)(467\538)

  NeuroTrace 500/525 Green Fluorescent Nissl        Stain(495\524)

  PKH67(488\500)

  SYTO 13(448\506)

  SYTO 16(489\520)

  SYTO 9(483\500)

  TurboGFP(482\503)

  wtGFP (wild type GFP, non-UV excitation)(474\509)

  YO-PRO-1(491\506)

  YOYO-1(491\508)

CY3

EX BP 545/25, BS FT 570, EM BP 605/70

  5-ROX (carboxy-X-rhodamine)(578\604)

  Alexa Fluor® 546(556\572)

  Alexa Fluor® 568(579\603)

  Amplex UltraRed peroxidation product (pH 7.5)(568\581)

  AsRed 2(576\592)

  ATTO 550(553\576)

  ATTO 565(563\592)

  BOBO™-3(570\605)

  BODIPY TMR-X(544\573)

  BODIPY TR-X (MeOH)(544\573)

  Cy3.5™(578\591)

  DsRed(559\583)

  DsRed-Expres(556\584)

  tdTomato(556\582)

  Ethidium bromide(518\603)

  Ethidium homodimer(527\617)

  KFP-Red(575\599)

  LOLO-1(568\580)

  LysoTracker Red(573\592)

  Magnesium Orange(550\574)

  mApple(566\594)

  Merocyanine 540(559\579)

  MitoTracker™ Orange(551\575)

  mRFP(555\583)

  mRuby(558\605)

  mStrawberry(574\596)

  mTangerine(568\585)

  Nile red-phospolipid(553\637)

  pHrodo™, succinimidyl ester(560\587)

  Rhod-2(553\577)

  Rhodamine phalloidin(558\575)

  Rhodamine Red-X(573\591)

  R-phycoerythrin (PE)(565\576)

  SNARF-1 488nm (ph 6.0)(548\586)

  SNARF-1 514nm (ph 6.0)(549\587)

  SpectrumOrange(554\587)

  Tetramethylrhodamine dextran(554\582)

  TRITC (Tetramethylrhodamine)(552\578)

  TurboRFP(553\573)

CY5

EX BP 640/30, BS FT 660, EM BP 690/50

  Alexa Fluor® 647(653\668)

  APC(651\660)

  APC (Allophycocyanin)(651\660)

  ATTO 647(644\670)

  ATTO 647N(645\668)

  BODIPY 650/665-X(646\664)

  Cy5™(649\666)

  DiD (DiIC18(5)) - Lipophilic Tracer(648\670)

  DyLight 649(651\673)

  FluoSpheres Dark Red fluorescent        microspheres(656\683)

  HiLyte Fluor™ 647(649\673)

  LIVE-DEAD Fixable Far Red Dead Cell  Stain(653\668)

  MitoTracker™ Deep Red(641\662)

  Red 650(649\665)

  SpectrumFRed (Far Red)(650\673)

  SYTO 60(650\681)

  TOTO-3(642\661)


检测器:

内置2个GaAsP超高灵敏度线性检测器,2个PMT线性检测器,高灵敏度单色制冷CCD,其中一个GaAsP做为Airyscan扫描模式的探测器。 

分辨率:

超高分辨模式下,XY方向上120nm,Z方向上350nm,成像速度5幅/秒(512×512 像素,16位)。超高分辨率快速成像模式,X方向上145nm,Y方向上180nm,Z方向上450nm,成像速度19幅/秒(512×512 像素,16位)。 

扫描分辨率:

分辨率可在4×1至8192×8192之间自由选择,各通道均可达到8192×8192的分辨率及16位灰度级。 

检流计扫描振镜: 

13幅/秒(512×512像素,16位);

430幅/秒(512×16像素,16位);

线扫描:

4线/秒至6875线/秒(512×1像素,16位)

快扫模式:

27幅/秒(488×488像素,16位)


CCD采集:

画幅采集速度38幅/秒(1936×1460);

光谱检测范围:400nm~1000nm;       

采样深度:高质量取图14bit

采样深度:

高质量取图14bit 在Airyscan扫描模式下有高分辨和高速扫描模式可选:高分辨模式时扫描速度7fps@512×512,扫描视野22mm。高速扫描模式下扫描速度28fps@512×512。 

扫描变倍:

最小光学变倍0.6 x ~40 x,可配合高倍物镜进行大视野、高速、高分辨扫描。 

活细胞孵育系统:

温度控制范围:室温至60℃,温度调节精度为0.01℃ CO2自动混气:浓度控制范围0至8%,调节精度0.01% 

加湿装置:

200ml纯水大容量加湿装置,同时也可加热 孵育仓:可匹配35mm和60mm培养皿,标准载玻片,小八孔培养槽 

图像处理软件:

具有光谱扫描及拆分功能,可去除自发荧光及荧光串扰;具有自由大图拼接功能,共定位分析功能及一些基本的测量功能;配置生理学分析模块,具有图形化的感兴趣区域荧光强度平均值分析,实时或在扫描完成后显示和计算离子浓度;具有直方图分析工具,可测量直线和任意形状曲线的荧光强度分布,可测量长度、角度、面积、荧光强度等。


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